آزمون ویتامین D3

شنبه 30 بهمن 1400

درخواست برای آزمایش ویتامین D در طی چند سال گذشته افزایش یافته است. بخشی از مطالعات اخیر ارتباط سطح این ویتامین در بدن با حفاظت در برابر اختلالات اسکلتی و غیر اسکلتی مانند بیماری های متابولیکی را نشان می دهد. دو روش مبنا از روش های آزمایشگاهی برای آنالیز ویتامین D وجود دارد. تفاوت اندازه گیری این روش ها به خاطر فرم ها و متابولیت های مختلف ویتامین D است که می تواند سردرگمی در نتایج ایجاد کند.

کروماتوگرافی مایع با عملکرد بالا (HPLC)، 25-hydroxy vitamin D₂ و D₃ را به صورت مشترک اندازه گیری می کند. روش های HPLC روشی استاندارد برای این تست است و از نظر  هزینه و سختی کار به صرفه تر است. در روش Hitachi از یک ستون فاز معکوس و یک آشکار ساز آرایه دیودی استفاده می شود که در طول موج بهینه آنالیز بسیار حساسی انجام می دهد.این روش می تواند برای تجزیه و تحلیل نمونه های غذایی و بیولوژیکی استفاده شود.

روش های کروماتوگرافی جدیدتر برای بهبود حساسیت، ساده سازی مراحل و اندازه گیری همه ی فرم های ویتامین D به طور همزمان توسعه داده شده اند. مثال آن   LC-MS/MS  که برای آنالیز تمام فرم ها و متابولیت های ویتامینD شامل  D₂, D₃و   25-hydroxy vitamin D به طور همزمان در سرم است. این پروسه از یک آشکار ساز یون ساز که به عنوان یونیزاسیون عکس فشار اتمسفری atmospheric pressure photo ionization (APPI) برای فراهم نمودن حساسیت بیشتر برای آنالیز، استفاده می شود. این روش نسبت به سایر روش های LC کمتر دشوار است زیرا به پیش تغلیظ نیاز ندارد.

اگرچه اکثر روش های LC-MS می توانند ویتامین D₂ و D₃ را جدا سازی کرده و اندازه گیری کنند، اما روشهای immunoassay توانایی این کار را ندارند. با توجه به اختصاصی بودن آنتی بادی مورد استفاده در روش immunoassay، برخی روش های immunoassay فقط می توانند یک فرم ویتامین  D را اندازه گیری کنند، برخی دو فرم را به طور یکسان اندازه گیری می کنند و بقیه vitamin D₂ و D₃ را با واکنش متقابل(cross-reactivity) متفاوتی اندازه گیری می کند.